Generación de Anticuerpos
Precios
| Descripción | Precio |
|---|---|
| por cada conejo | 470 € |
| por cada conejo adicional con el mismo antígeno y el mismo protocolo | 350 € |
| administración de 4º booster a un conejo | 100 € |
| semana de estabulación adicional | 30 € |
Protocolo Estándar para la Generación de Sueros Policlonales en Conejo
- Animales utilizados: hembras de conejo (Orhyctolagus cuniculus, raza New Zealand White)
- Peso de los animales: entre 1,8 y 2,0 kg
- Aclimatación: los conejos llegan a las instalaciones una semana antes del comienzo del protocolo de inmunización para una correcta aclimatación.
Obtención de Suero Pre-inmune
Antes de la primera inmunización, se extraen 13 ml de sangre completa y tras dejar coagular se separa el suero, obteniéndose alrededor de 7 ml de suero preinmune.
Procedimiento para obtener los sueros: la sangre se deja a temperatura ambiente durante una hora, y se mantiene a +4ºC durante toda la noche. Luego se centrifuga durante 5 min a 3000 rpm y 4ºC para separar el suero del coágulo formado. El suero obtenido se etiqueta y se conserva a -20ºC.
Inmunización
La inmunización se realiza por vía intradérmica (día 1), administrándose en el inóculo 250 µg de antígeno en un volumen final de 1 ml (adición de PBS hasta 0,5 ml + 0,5 ml de Adyuvante Completo de Freund).
Después del la inmunización se administran dosis de recuerdo (boosters) cada tres semanas (días 22, 43 y 64 del protocolo) hasta completar un total de tres. En cada booster se administran 125 µg de antígeno en un volumen de 0,5 ml por vía intramuscular (adición de PBS al antígeno hasta 0,25 ml + 0,25 ml de Adyuvante Incompleto de Freund), siguiendo el mismo proceso que en la inmunización.
Dos semanas después de la administración de cada booster (días 38, 59 y 80 del protocolo) se procede a realizar la sangría para la obtención de los diferentes sueros. La sangre se extrae por punción de la arteria auricular. De cada sangrado se obtienen entre 15 y 30 ml de sangre completa (que equivalen a 7 y 15 ml de suero). El volumen de suero obtenido depende de:
- El peso del animal (nunca se obtienen más de 10 ml por kg de peso corporal).
- El estrés que pueda sufrir el animal en el momento de la punción. Si esto ocurre, y no se llega a obtener la cantidad de sangre deseada, se repetirá el sangrado tras dejar al animal recuperarse durante una semana. Si fuera necesario, se sedará el animal para el procedimiento de extracción.
- El proceso de formación de coagulo puede variar reduciendo la cantidad de suero obtenido.
- Para la sangría final, se anestesia al animal y se extraen entre 70 y 100 ml de sangre completa de la arteria auricular y/o por punción intracardiaca (obteniéndose entre 20 y 50 ml de suero). Tras la sangría, el animal se sacrifica con pentobarbital.
Los sueros serán enviados al cliente tras su obtención. Con el envío de los sueros correspondientes al 3er Booster se solicita confirmación del investigador para proceder a la sangría final y sacrificio. Dependiendo del título* de los sueros recibidos, el investigador puede solicitar la administración adicional de un 4o Booster.
| Día | Etapa/Actividad del Protocolo | Muestra Obtenida |
|---|---|---|
| -7 | Aclimatación del/los los conejo/s | --- |
| 1 | Obtención de Suero Pre-inmune / Inmunización | 5-7 ml de suero [0] |
| 22 | 1er dosis de recuerdo (Booster 1) | --- |
| 38 | Obtención de suero [1] para titular* | 7-10 ml de suero [1] |
| 43 | 2da dosis de recuerdo (Booster 2) | --- |
| 59 | Obtención de suero [2] para titular* | 7-10 ml de suero [2] |
| 64 | 3er dosis de recuerdo (Booster 3) | --- |
| 80 | Obtención de suero [3] para titular* | 15 ml de suero [3] |
| 87 | Sangría final | 20-50 ml de suero [4] |
* El título de anticuerpo deberá ser determinado por el investigador
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